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核酸蛋白酶檢測試驗
核酸蛋白酶檢測試驗
清洗層析柱。
測定層析柱的內徑、高度,計算所需凝膠的體積。
根據Sephadex G-50的膨脹體積,計算所需干凝膠的質量。
稱取相應質量的干凝膠,加入其總吸液量10倍的0.02 mol/L PBS。
在100℃水浴中加熱溶脹1小時以上,溶脹之后將極細的小顆粒傾瀉出去。
用真空干燥器抽盡凝膠中空氣,并將凝膠上面過多的溶液傾出。
關閉層析柱出水口,向柱管內加入約1/4柱容積的洗脫液。
邊攪拌,邊將薄漿狀的凝膠液連續傾入柱中,使其自然沉降。
等凝膠沉降約2-3cm后,打開柱的出口,調節合適的流速,使凝膠繼續沉積。
待沉積的膠面上升到離柱的頂端約5cm處時停止裝柱,關閉出水口。
通過2-3倍柱床體積的洗脫液使柱床穩定(流速0.5~1 mL/min)。
始終保護凝膠上端有一段液體。
準備好恒流泵、分部收集器、核酸蛋白檢測儀及記錄儀。
打開柱上端的螺絲帽塞子,吸出層析柱中多余液體直至與膠面相切。
沿管壁將5%丙酮溶液0.6 mL小心加到凝膠床面上,應避免。
將床面凝膠沖起。
打開下口夾子,使樣品溶液流入柱內,同時收集流出液,當樣品溶液流至與膠面相切時,夾緊下口夾子。
按加樣操作,用1 mL洗脫液沖洗管壁2次。
加入3-4 mL洗脫液于凝膠上,旋緊上口螺絲帽。
將層析柱進水口連通恒流泵,柱出水口與核酸蛋白質檢測儀比色池進液口相連,比色池出液口再與自動部分收集器相連,用兩根導線將檢測儀與記錄儀連接起來,設置好基線的位置。