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ELISA夾心法測定單抗的使用方法
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ELISA夾心法測定單抗的使用方法：
 　　1、首先將試劑盒恢復(fù)室溫（大約30分），然后用純水把清洗液配成工作濃度（一份濃縮清洗液加19份純水）。
　　2、取出酶標(biāo)板。每個標(biāo)本需要6孔，陽性對照6孔。多余的用自封袋保存，記得放入干燥劑。
　　3、將細(xì)胞培養(yǎng)上清（或特異親和純化的抗體）50μl加入酶標(biāo)微孔板，每個標(biāo)本加6孔，陽性對照也是加6孔每孔50μl。然后每孔再加入50μl標(biāo)本稀釋液。貼上封板膜37℃溫育30分鐘。
　　4、棄去板內(nèi)液體，洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機(jī)洗5遍。再在每個標(biāo)本的6孔中分別加入6種酶標(biāo)二抗各100μl，通用陽性對照的6孔也一樣。在加樣圖上或酶標(biāo)板上做好標(biāo)記。貼上封板膜37℃溫育30分鐘。
　　5、吸棄板內(nèi)液體，洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機(jī)洗5遍。每孔分別加入顯色劑A和顯色劑B各50μl，換一張新的封板膜貼板避光37℃顯色20分鐘。
　　6、本試劑盒特異性好一般肉眼即可觀察出結(jié)果，看顯色藍(lán)的那個孔所對應(yīng)的酶標(biāo)二抗就知道此標(biāo)本的Ig類或亞類。更可將反應(yīng)終止液（每孔50μl）終止反應(yīng)后用酶標(biāo)儀450nm測定波長，630nm參考波長雙波長測定結(jié)果，參看高值孔所對應(yīng)的酶標(biāo)二抗就知道此標(biāo)本的Ig類或亞類。陽性對照0D小于0.5實驗無效，需要重做。